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    离子交换填料
    疏水填料
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    环境基质标准物质
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    化妆品能力验证样品
    制药能力验证样品
    土壤质控样
    无机标液
产品分类
密理博 超滤管 内管15ml,外管50ml
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密理博 超滤管 内管15ml,外管50ml 
价格:
120.00
评论:0
规格:
  • UFC900396(3kd)
  • UFC901096(10kd)
  • UFC903096(30kd)
  • UFC905096(50kd)
  • UFC910096(100kd)
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品牌: Millipore 别名: 超滤离心管
货号: UFC900396/UFC901096/UFC903096/UFC905096/UFC910096 规格: 15ml
包装: 24支/盒 货期: 3-5天

特点和优点:
完全停止:避免了继续旋转脱水太干,提供可预测的浓缩因子,在同时处理数个样品的情况下,不需校准。

竖向滤膜:与滤出液平行而不是垂直,因此不易堵塞,不浪费,过滤迅速,一个步骤即可达到25至80倍的浓缩。

化学相容范围广:热密封滤膜消除了粘合和下游提取物问题;

相容pH值范围:1至9。

反向旋转回收:能最充分地回收蛋白,不会引入吸量误差;低结合度滤膜和聚丙烯外壳可实现 90%样品回收。

可靠:在一个牢固而光滑的整体式装置中旋转宝贵的样品,无泄漏。

应用
- 蛋白浓缩
- 核酸浓缩
- 缓冲液置换
- 透析
- 脱盐


蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管(MWCO10kD)。也有其它型号 的、不同体积大小和MWCO超滤管可选,视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用,使用一次就扔掉太浪费。

1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,最常见的是Ultra-15(10kD)。到底选择多大截留分子量比较合适呢?10kDa、 5kDa、还是30kDa?通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤 管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同,表格中有。

2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。

3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。不同离心机的转速 rpm换算成g之后,有所不同。具体可参阅附件里的说明书。离心机的加速度调至最低档,减小对膜的压力。注意,一定要等离心机达到目的转速之后,方可离开 离心机,否则离心机出问题时,无法第一时间处理,后果不可预测!膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速 开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。

4、当浓缩到剩下1ml时,【取50ul国产Bradford溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将 上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管,用5mg/ml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测】,继续加入 剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原 因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的Buffer,直到蛋白不发生沉淀为 止。

5、前面几步用以浓缩蛋白,如果要换Buffer,在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候,轻轻加入新的Buffer(经0.22um超滤膜超滤),再 浓缩至1ml左右,连续三次,最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定,一般不多于500ul,也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍 左右的体积浓缩算,三次达到1000倍以上,基本上可以达到换buffer的目的。

6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作,用黄枪头(200ul)取,轻轻顺着边缘插入枪头,轻轻吹打、混匀蛋白液,注意不要碰到超滤膜,然后吸取 浓缩液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最后一点浓缩液不必吸取,否则难度太大,有可能损坏超滤膜。最后加入MilliQ水到超滤管中,没过 超滤膜,防止膜失水变干。

7、以下是处理超滤管,重复利用超滤管的步骤。

8、倒出超滤管里的水,用milliQ水轻轻润洗几次,【若管底有可见的蛋白沉淀,可以先加入水,然后用枪头吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉淀悬 起,然后倒掉,不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液,室温放置20min,期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液,将 管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时,不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗,内壁再用 MilliQ水洗干净。

9、取出浸没的管芯,加至接近满的MilliQ水,50ml管也加满MilliQ水,将管芯慢慢放入50ml离心管,排出部分水,然后盖上盖子,放4度保存,直到下次使用。一般来说,按照上述步骤和注意事项,每根管用三四年不会坏。

问:超滤管能重复使用吗?

答:可以。一般也就用个一两次就换新的,网络显示可用2-5次。

用离心管浓缩一种蛋白,可以考虑使用,先用缓冲液洗涤,再用去离子水反复洗涤。残留蛋白杂质多时,可以0.1N NaOH 清洗以及0.1% SDS清洗,去除和溶解蛋白质及其他杂质的。然后将超滤离心管的超滤膜泡在叠氮钠溶液或20%的乙醇溶液中,防止长菌,而且防干,只要超滤膜侵了水,就不可以再让它干,否则超滤膜的分子结构就变了。

不可以用超声洗涤!


说明书:


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