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Effectene Transfection Reagent
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Effectene Transfection Reagent 
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品牌: QIAGEN 别名: Effectene转染试剂
货号: 301425/301427 规格: 1ml
保存: 2-8℃ 货期: 5-7天

对原代细胞和敏感细胞系的DNA转染

  • 在血清存在的情况下进行高效转染

  • 只需使用少量DNA 即可达到高效转染

  • 高转染效率而且较低的DNA使用量

  • 适合高通量筛选

Effectene Transfection Reagent是一种非脂质体的脂类转染剂,能将DNA转入多种类型的细胞。因其毒性低,非常适合敏感细胞如原代细胞的转染。


使用Effectene Reagent获得高转染效率。

比较使用Effectene Reagent和两种常用的脂质为基础的试剂的转染效率。在优化的条件下,依照供应商试剂的使用指南,鼠畸胎F9细胞(5 x 105)在6孔板中转染荧光素酶报告质粒。转染48小时后,通过测量荧光素酶活性,确定转染效率,使用相对光单位(RLU)。 (数据由法国I. Clavereau, D. Petitprez, and I. Van Seuningen, Unité INSERM 377, Place de Verdun, Lille Cedex提供。)


血清和DNA量vs.转染效率。

检测血清和DNA量对于使用Effectene Reagent进行转染的影响。转染前一天,将COS-7细胞(每孔2 x 104)接种在96孔板中。在血清存在和不存在的两种条件下,使用0.01–1.0 µg β-半乳糖苷酶报告质粒和0.08–8.0 µl Enhancer(DNA:Enhancer为1:8)和2 μl Effectene Reagent转染细胞。每个柱形代表转染后48小时,4次重复实验的平均转染效率。


Effectene转染流程。

首先将DNA与Enhancer以及缓冲液(提供理想的盐浓度条件,促进DNA的高效缩合)混合。这一步骤仅需 2–5分钟。然后加入Effectene Reagent,将混合液孵育5–10 分钟,形成Effectene-DNA复合物。将复合物与培养液混合(培养液可含有血清和抗体),然后直接加入细胞中。之后对细胞进行孵育、采集和基因表达分析。


在原代细胞中有40%的转染效率。

使用Effectene Reagent,在6孔板中,为兔主动脉平滑肌原代细胞转染0.4 µg的绿色荧光蛋白报告基因质粒。转染24小时后,用荧光显微镜观察细胞。通过FACS分析确定,约40%的细胞被转染。(数据由德国Mainz,Dept. Clinical Pharmacology,2nd Medical Clinic,K. Veit提供)。


使用Effectene Reagent转染寡核苷酸。

C6成胶质细胞瘤细胞(1 x 104)转染FITC-labeled CD44反义寡脱氧核苷酸(ODN)或用Effectene-ODN复合物。转染16小时后,通过免疫荧光分析细胞内转染的ODN的积累和分布。[A]反义寡核苷酸(2 µg)。[B]反义寡核苷酸(0.04 µg)与Effectene Reagent的复合物。转染的反义寡核苷酸在照片中为黄色。(数据由德国汉诺威,汉诺威医学院神经病理学研究所G. Beutel 和M. Schott提供)。


性能

Effectene Transfection Reagent 的操作流程简单, 转染质粒DNA比用其他的试剂获得的转染效率高。Effectene Transfection Reagent适用于带有寡核苷酸的敏感细胞系的转染。特别适用于原代细胞。 使用Effectene Transfection Reagent已成功转染了许多细胞系和原代细胞。有针对不同细胞类型的转染方案。细胞毒性低,因为可在血清存在的情况下使用Effectene Transfection Reagent进行转染且DNA用量低。

DNA重组技术应用于药物研发领域,导致对高通量转染需求增加。使用Effectene Transfection Reagent进行转染DNA用量低,手动操作少。此外,无需移除转染复合物,使该试剂高度适用于高通量筛选。Effectene Transfection Reagent适用于批量转染。


原理

Effectene Transfection Reagent是一种全新的非脂质体的脂类转染剂,将DNA 与浓缩增强子和优化的缓冲液混合使用以达到高效转染。浓缩增强子先聚合DNA分子,Effectene Transfection Reagent随后用阳离子脂质包围聚合的DNA分子。采用一种特殊有效的方法将DNA转入真核细胞。这种特性保证了复杂复合物转染的可重现性。


操作流程

Effectene流程分为两步。将DNA与浓缩增强子混合后,加入Effectene Transfection Reagent形成复合物,这一步只需2–5分钟。然后加入Effectene Transfection Reagent,与混合物一起反应5–10分钟以形成Effectene–DNA复合物。复合物与培养基混合(可以含有血清和抗体),直接加入到细胞中。培养细胞至成熟,分析基因表达。


应用

Effectene Transfection Reagent适用于多种类型细胞的瞬时和稳定转染。


特点

参数

Applications

RNAi studies, gene expression studies, high-throughput transfections

Cell type

Eukaryotic cells (primary cells and sensitive cells)

Controls

Not included

Features

Non-liposomal lipid formulation, minimal cytotoxicity

Nucleic acid

DNA

Number of possible transfections

160 transfections in 12-well plates / 1 ml reagent

Technology

Non-liposomal lipid formulation in conjonction with a DNA-condensing enhancer

Transfection type

Transient and stable transfection


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